Lors des joutes organisées pour le mariage de sa fille Elisabeth avec Philippe 2 d'Espagne, il se mesure à Gabriel de Montgomery, capitaine de sa Garde écossaise.
Il reçoit un coup de lance en plein visage, que la grille en or de son heaume n'arrête pas. La lance traverse l’œil. Malgré les soins d'Ambroise Paré et d'André Vésale, le roi meurt quelques jours plus tard.